一、实验原理
慢病毒包装是慢病毒(Lentivirus)载体的构建过程重要的一环。慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)来源的一种病毒载体,慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下,经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒,通过感染细胞或活体组织,实现外源基因在细胞或活体组织中表达。
二、操作步骤:
1、目的基因克隆
2、慢病毒质粒载体构建
3、质粒载体大量抽提
4、载体大量包装与浓缩
5、滴度测定
6、获取稳定感染株
7、目的基因效率鉴定
三、客户提供
1、目的基因的名称、种属、序列或GeneBank Accession Number
2、对启动子和标记基因的要求信息
3、若需要检测靶基因的表达,需提供相应抗体或由公司代购
四、交付内容
1、目的和NC慢病毒,总量大于等于1E+8。
2、实验报告:详细操作步骤、质粒图谱、构建载体的测序报告、滴度测定报告及相关的外源基因表达分析(可选)。
五、实验结果部分图片
六、项目列表
OE/KD 慢病毒包装和稳转株构建检测 | ||
慢病毒OE质粒载体构建 | 从克隆载体中提取基因,克隆,载体构建,测序正确 | 5-15个工作日 |
慢病毒KD穿梭载体构建 | 将三条shRNA分别构建至慢病毒干扰载体,测序成功 | 5-10个工作日 |
慢病毒包装 | 抽提、包装与浓缩、滴度测定 | 15个工作日 |
获取稳定感染株 | 将慢病毒感染目的细胞,并通过嘌啉霉素筛选出稳定感染株 | 20个工作日 |
目的基因过表达/干扰效率鉴定 | 通过PCR/western blot鉴定目的基因下调效率 | 10个工作日 |